快捷

薇菜作为食用蔬菜已有悠久的水煮历史，过去在荒年是薇菜救荒草，现已步入高档餐桌，中食其经济效益为一般蔬菜的品添4～5倍。野生薇菜鲜嫩味美，加剂营养丰富，水煮未展开的薇菜嫩叶尤为上品。薇菜既可鲜食，中食又可腌渍、品添干制，加剂是水煮向日本出口的大宗山珍野菜。水煮薇菜中主要含有防腐剂和甜味剂，薇菜由于日本的中食标准严苛，因此检测出口食品中的品添食品添加剂含量达到标准，对于国内食品添加剂含量的加剂检测也是一种保障。

我国标准检测方法有很多，如滴定法、比色法、薄层色谱法、气相色谱法等，但都是对样品分别处理进行不同方法的测定，没有同时检测的方法。现在相对先进的检测机构都在研究这5种食品添加剂同时检测的方法，针对于不同的基质使用不同方法，目前按照检测样品的不同大致可以分为肉食品、饮品、乳制品、含油量高的基质和普通基质等检测方法。在我国国标中，最早出现对于食品添加剂检测的是在2003年，那时的检测针对于单独的添加剂且方法相对落后。本法采用一种简单的前处理方法，使用的样品为水煮薇菜，基质简单易得，用高效液相色谱法对5种添加剂同时进样，一次检测得到多种结果，大大节省了人力、物力和时间，结果准确可靠。

一、材料与方法

1、材料与试剂

甲醇（色谱纯）：FisherScientific公司；乙酸铵（分析纯）、称取1.54g乙酸铵加水溶解并稀释至1000mL，静置，过0.45μm孔径滤膜，盐酸（分析纯）：量取100mL盐酸，与100mL水充分混合，静置）；氨水、乙醚（分析纯）：天津市科密欧化学试剂有限公司；实验用水为屈臣氏蒸馏水

2、仪器与设备

LX—130离心机（控温）日本TOMY公司；UW402S电子天平，梅特勒一托利多有限公司；UMV一2多管涡旋混合器，北京优晟联合科技有限公司；Agilent一1100高效液相色谱仪，安捷伦公司；50mL离心管、10mL移液管、移液枪、一次性吸管、pH试纸、0.5μm水性滤膜等。

3、样品前处理

大多数样品中存在许多大分子物质，如蛋白质、脂肪等，需要使用沉淀剂进行净化处理，如乙酸锌、亚铁氰化钾等，但本样品不含有上述大分子物质，故无需进行净化操作。

本法为反提法，即将样品中的食品添加剂先正提取到乙醚层中，后用水反提取至水层中，定量检测水层中的食品添加剂。

将水煮薇菜经破碎处理后，称取2.0g样品于50mL离心管中，加水10mL和0.5mL盐酸（1+1）进行酸化处理。加入乙醚8mL震荡提取2次（共16mL），合并提取液。将提取液震荡，离心（4000r／nlin，5min），弃掉下层水层，向提取液中准确加入10.0mL水，加氨水调节pH为7～8，震荡离心（4000r／min，5min），取下层水层过0.45μm水性滤膜。

4、标准品配制

标准物质纯品溶液稀释，配制成10mg／L浓度的储备液，将储备液稀释成0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.10rng／mL的标准溶液，用于测定标准曲线。

5、色谱柱条件

WatersSymmetryShieldC18（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱，流动相为0.02mol／L乙酸铵一甲醇（100+5）缓冲溶液，检测波长为220mm，紫外检测器，柱温25℃，流速1mL／min，进样量10μL。

6、精确度测定

为保证试验精确度，取6份样品分别编号1，2，3，4，5，6，各称取2g于50mL离心管中，加入10mL水和0.5mL盐酸（1+1）进行酸化处理。分别加入8mL乙醚提取2次（共16mL），合并提取液经震荡离心（4000r／min）5min，弃去下层水层，准确加入10.0mL水，用氨水调节pH为7～8，震荡离心（4000r／rnjn，5min），取下层水层过0.45μm水性滤膜。

7、准确度测定

为保证试验方法提取到的添加剂含量的有效性，人为地向样品中添加定量标准物质进行检测，通过回收率判断样品的检测结果是否有效。大量实验证明，当回收率在85％～110％之间时，结果可靠。向样品中加入1mg／L的混标溶液，与样品进行相同的前处理步骤，经0.45μm滤膜过滤后进仪器检测。

二、结果与分析

1、标准曲线的建立

对混标稀释后浓度为0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.10mg／mL的标准系列溶液进行测定，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，分别得到回归方程，见表1。安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠这5种添加剂的出峰图见图1，按照出峰的时间分别是安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠。

由表1可知，该混标溶液出峰时间分散，在检出限浓度范围内呈良好线性关系。

由图1可知，5种添加剂出峰时间间隔明显，且峰不存在重合现象，即如果样品中含有上述5种添加剂，谱图中会在相应位置出峰。

2、样品测定

对水煮薇菜使用反提法检测食品添加剂含量，其结果见表2，谱图见图2。

对比图1和图2可以看出，图2中的谱图没有在相应位置出峰，所以水煮薇菜样品中不含有安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠这5种食品添加剂。

3、精确度试验

为保证样品的精确度，分别对水煮薇菜进行6次平行试验，试验结果见表3。
 

由表3可知，进行6次平行试验均无检出添加剂，可能的情况是含有添加剂，但含量低于检出限导致未检出；另一种情况是均不含添加剂，故无检出。上述2种情况均达到标准，结果判定为水煮薇菜不含有安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠5种添加剂。

4、准确度试验

为了保证检测的准确度，进行回收试验，标准曲线见图3，结果见表4。

由图3和表4可知，人为加入含有混标的样品检测结果是含有添加剂的，且同一种方法回收得到的添加剂含量不同。回收率可以证明该方法得到的结果可信，因为在前处理过程中提取得到的添加剂会有一定程度的损失；当回收率低于100％时证明提取不完全或者有损失；当回收率高于100％时，说明样品中同时也含有该添加剂。本法的相关系数均在0.999以上，回收率在89％以上，说明试验结果可靠。

5、结果计算

样品中山梨酸、苯甲酸、脱氢醋酸钠、安赛蜜、糖精钠的含量按照下式计算：

式中：X为样品中食品添加剂含量，mg／kg；A为进样体积中食品添加剂的含量，mg；V为试样稀释体积，mL；m为试样质量，g。

三、讨论

试验表明：对样品进行破碎、浸提后，使用WatersSymmetryShieldC18（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱，流动相为0.02mol／L乙酸铵一甲醇（100+5）缓冲溶液，检测波长为220mm，紫外检测器，柱温25℃，流速1mL／min，进样量10μL时，混标中安赛蜜、糖精钠、山梨酸、苯甲酸、脱氢醋酸钠的出峰时间分别为4.785，6.681，8.117，11.310，12.987min，样品中未检出。不同回收率表明在实验操作过程中，会有不明原因的损失，可能是提取时间不足，可能是提取试剂还有待改善，还有可能是检测时间不及时，导致部分添加剂降解。在国标中以水煮薇菜为例，使用反提法检测5种食品添加剂，方法简便，可以节约大量人力、物力，节约成本和资源，加快工作效率。

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